抗血管生成療法（AAT）在鼻咽癌等多種惡性腫瘤治療中已被應用超過二十年，然而其臨床療效仍然有限。雖然靶向VEGF通路的抗血管生成藥物（AAD）能(neng)夠(gou)改(gai)善(shan)患(huan)者(zhe)的(de)無(wu)進(jin)展(zhan)生(sheng)存(cun)期(qi)和(he)局(ju)部(bu)控(kong)製(zhi)時(shi)間(jian)，但(dan)幾(ji)乎(hu)所(suo)有(you)患(huan)者(zhe)都(dou)不(bu)可(ke)避(bi)免(mian)地(di)會(hui)產(chan)生(sheng)治(zhi)療(liao)耐(nai)藥(yao)性(xing)，導(dao)致(zhi)總(zong)體(ti)生(sheng)存(cun)率(lv)未(wei)見(jian)顯(xian)著(zhu)提(ti)升(sheng)。這(zhe)種(zhong)耐(nai)藥(yao)現(xian)象(xiang)的(de)潛(qian)在(zai)機(ji)製(zhi)一(yi)直(zhi)是(shi)腫(zhong)瘤(liu)治(zhi)療(liao)領(ling)域(yu)亟(ji)待(dai)解(jie)決(jue)的(de)關(guan)鍵(jian)問(wen)題(ti)。

血管生成擬態（Vasculogenic Mimicry， VM）作為一種獨立於內皮細胞和VEGF的新型腫瘤血液灌注係統，在多種高侵襲性和轉移性惡性腫瘤中被發現，並與腫瘤轉移和不良預後密切相關。VM由高度惡性的腫瘤細胞和基底膜形成
，具有成熟的微循環功能，這可能解釋了為什麼VM對AAD不敏感。然而
，VM形成在AAD耐藥中的具體作用機製以及如何通過表觀基因組學調控VM形成仍不清楚。這提出了一個關鍵問題:在抗血管生成治療過程中，是否存在代償性VM形成導致治療耐藥?其分子調控機製是什麼?

 

2025年6月17日
，南通大學附屬醫院耳鼻咽喉頭頸外科研究所的遊波團隊在《Cell Reports Medicine》雜誌上發表了一篇題為“DDX5 super-enhancer promotes vasculogenic mimicry formation and metastasis in nasopharyngeal carcinoma by enhancing ADAM10 transcription”的文章。該研究揭示了抗血管生成藥物耐藥的重要機製——代償性血管生成擬態形成。研究團隊采用DIA質譜蛋白質組學技術篩選出ADAM10作為促進VM形成的關鍵蛋白，發現其在轉移性鼻咽癌患者外泌體中顯著富集。通過CUT&Tag測序分析H3K27ac修飾識別超級增強子，結合Hi-C技術解析三維基因組結構
，發現DDX5和E2F1兩個轉錄因子通過遠程環狀相互作用被超級增強子激活
，進而上調ADAM10表達。體內外實驗證實，IM聯合尼妥珠單抗能夠同時抑製血管生成和VM形成
，有效克服AADs耐(nai)藥(yao)性(xing)，抑(yi)製(zhi)鼻(bi)咽(yan)癌(ai)轉(zhuan)移(yi)並(bing)改(gai)善(shan)預(yu)後(hou)。該(gai)研(yan)究(jiu)為(wei)理(li)解(jie)抗(kang)血(xue)管(guan)生(sheng)成(cheng)治(zhi)療(liao)耐(nai)藥(yao)機(ji)製(zhi)提(ti)供(gong)了(le)新(xin)的(de)表(biao)觀(guan)遺(yi)傳(chuan)學(xue)視(shi)角(jiao)，並(bing)提(ti)出(chu)了(le)潛(qian)在(zai)的(de)聯(lian)合(he)治(zhi)療(liao)策(ce)略(lve)。（CUT&Tag和Hi-C由表觀生物提供）

研究技術路線圖

關鍵研究結果

一、

VM與抗血管生成治療耐藥的臨床相關性

臨床病理分析和動物模型研究共同揭示了VM在鼻咽癌進展和治療耐藥中的關鍵作用。通過PAS/CD31雙染色技術成功區分了VM和MV兩種微循環結構
，統計分析顯示晚期患者（III-IV期）的VMD和MVD均顯著高於早期患者（I-II期）。

 

生存分析證實高VMD或高MVD的患者表現出更差的總體生存率。

 

更重要的發現來自鼻咽癌原位移植小鼠模型的動態監測:盡管NTZ治療未能顯著抑製腫瘤生長或轉移，但微循環係統分析發現MV密度下降的同時VM密度出現代償性升高，使得總體血管密度保持穩定。這一現象首次在體內動態可視化了AAD治療過程中的代償性VM形成
，為理解治療耐藥提供了直接證據，提示單純靶向VEGF依賴性血管生成的局限性。

 

二、

外泌體ADAM10介導VM形成和腫瘤轉移

係統的功能分析確立了外泌體ADAM10在VM形成中的核心地位。體外研究顯示高轉移性細胞係形成的管狀結構顯著多於非轉移性細胞係
，經侵襲篩選獲得的CNE2-T3細胞表現出更強的間質樣形態和VM形成能力。關鍵發現是轉移性患者血清外泌體能夠誘導受體細胞形態轉變、促進VM形成並增強遷移能力，其效應顯著強於非轉移性患者外泌體。

DIA質譜蛋白組學分析（每組6例）係統比較了不同來源外泌體的蛋白表達譜
，在轉移性外泌體特異性上調的蛋白中，ADAM10表現出最顯著的差異性表達。

功能驗證顯示ADAM10敲低的細胞分泌的外泌體顯著抑製受體細胞的VM形成、遷移和侵襲，而轉移性外泌體增強這些惡性功能，ADAM10特異性抑製劑能夠有效逆轉外泌體的促進作用。這些結果揭示了外泌體介導的ADAM10水平轉移在腫瘤微環境重塑和VM形成中的關鍵作用。

 

三、

ADAM10驅動VM形成並介導抗血管生成治療耐藥

臨床標本分析和功能實驗係統驗證了ADAM10在鼻咽癌進展中的驅動作用。免疫組化分析顯示ADAM10高表達與晚期臨床分期和不良預後相關，ADAM10表達水平與VMD呈顯著正相關。

 

體外功能研究證實ADAM10敲低顯著抑製EMT進程、VM形成、遷移和侵襲能力。

 

原位移植模型的係統評估揭示了聯合治療的關鍵價值:單獨NTZ治療或ADAM10敲低均未顯著抑製腫瘤生長
，但ADAM10敲低聯合NTZ治療產生了顯著的協同抗腫瘤效應，表現出最高的生存率和最低的轉移率。

 

微循環係統分析闡明了作用機製:轉移性外泌體同時富集MV和VM；NTZ單藥降低MVD但導致VMD代償性升高;ADAM10敲低單獨使用降低VMD並適度降低MVD；而聯合治療有效抑製EMT、ADAM10表達以及MV和VM雙重微循環係統
，證實了通過同時靶向兩種血液供應通路克服AAD耐藥的可行性。

 

四
、

DDX5超級增強子驅動的轉錄調控網絡激活ADAM10

表觀基因組學分析揭示了ADAM10轉錄上調的多層次調控機製。H3K27ac CUT&Tag測序顯示ADAM10未直接關聯超級增強子

，Hi-C分析也未發現其與遠端增強子的直接相互作用，提示通過轉錄因子介導的間接調控。整合分析篩選出候選轉錄因子，功能驗證顯示隻有DDX5和E2F1的敲低能夠顯著降低ADAM10表達。

Hi-C數據揭示了CNE2特異性的長程染色質相互作用:超級增強子區域與DDX5和E2F1的啟動子區域形成遠程環狀結構。熒光素酶報告基因和ChIP實驗證實DDX5和E2F1能夠結合ADAM10啟動子並增強其轉錄活性。

DDX5或E2F1敲低以及BET抑製劑JQ1處理均導致ADAM10表達下降，並抑製EMT、遷移、侵襲和VM形成。這一"超級增強子-轉錄因子-效應基因"三級調控軸的發現
，不僅闡明了ADAM10上調的表觀遺傳基礎
，也為理解腫瘤細胞如何通過重編程染色質結構獲得惡性表型提供了範例。

 

五、

DDX5超級增強子功能驗證及靶向治療策略

為精確解析超級增強子功能
，研究采用CRISPR-Cas9技術分別刪除DDX5和E2F1超級增強子的關鍵組分。

 

DDX5三個超級增強子關鍵組分任一刪除均顯著降低DDX5和ADAM10表達，抑製EMT、遷移、侵襲和VM形成;而E2F1超級增強子刪除無明顯效應，突顯了DDX5超級增強子的核心調控地位。

 

轉錄因子篩選發現NKX2.5、AML和SRY結合評分最高，ChIP和熒光素酶實驗證實它們結合DDX5超級增強子關鍵組分並激活轉錄。

 

這三個轉錄因子在鼻咽癌組織和高侵襲性細胞中表達上調，其敲低均導致DDX5和ADAM10下調並抑製惡性功能。基於完整調控網絡，研究通過轉錄組學和虛擬篩選發現ingenol mebutate與DDX5具有優異結合能力。

體外實驗證實IM降低DDX5和ADAM10表達
，抑製VM形成和遷移。在原位移植模型中

，IM聯合NTZ治療顯著改善生存率
、降低轉移率，同時抑製MVD和VMD，為AADs耐藥患者提供了潛在的治療選擇。

總結

研究揭示了鼻咽癌抗血管生成治療耐藥的核心機製，發現AAD治療導致傳統血管減少的同時誘導血管生成擬態代償性增加。轉移性患者血清外泌體富集的ADAM10通過"教育"受體細胞促進VM形成。表觀遺傳學分析揭示了NKX2.5/AML/SRY-DDX5超級增強子-ADAM10的三級轉錄調控軸，其中DDX5超級增強子發揮核心作用。基於此機製，研究提出"雙重靶向微循環"策略
，發現ingenol mebutate聯合AAD能同時抑製VM和MV，顯著改善生存並降低轉移。這一"老藥新用"策略為克服AAD耐藥提供了理論基礎和潛在治療方案

，具有重要臨床轉化價值，但仍需在免疫健全模型中驗證並評估IM的特異性和安全性。